影响色谱柱性能的因素有哪些?随着HPLC的普及,分析方法学的开发成为一个合格的分析研究员的标配,而色谱柱的筛选是分析方法开发的第一步,也是最重要的一步,在我们使用色谱柱的时候会有很多因素影响它的性能,那么影响色谱柱性能的因素有哪些?下面就给大家详细介绍一下。
影响色谱柱性能的物理参数
(1)硅胶纯度
硅胶纯度和残留金属离子浓度,硅胶的杂质会影响化合物的峰形,硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾。
(2)色谱柱尺寸
填料床的长度和内径,增加色谱柱长度,可以在一定程度上提高柱效,但也会升高压力和导致峰展宽;宽柱径,提高载样量,但也会增加横向扩散,同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂,可减少横向扩散,但压力较大,对系统要求较高。
(3)颗粒形状及粒径
球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀,不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀,容易谱带展宽;平均颗粒直径,粒径越小,柱效越高,柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低,压力越大。
(4)颗粒表面积
颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/g表示,相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力,更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态,更适合梯度洗脱程序。