荧光定量分析PCR技术的特点

PCR技术的优点

1.操作简便

应用PCR方法的早期阶段操作萦琐，因为使用的聚合醉是大肠杆菌DNA聚合酶I的大片段，即Klenow片段，而不是耐高温的TaqDNA聚合酶，而且操作也未实现自动化。目前使用的是耐高温的TaqDNA聚合酶，其操作也实行了电脑控制的DN八扩增仪的自动化，只要将扩增反应所需要的特定程序输入DNA自动扩增仪，操作台PCR操作箱把反应所需要的全部材料混合均匀，置入仪器内，反应就会按照所输入的正确程序进行。如果需要，还可随时予以调整。

2. 省时

应用TaqDNA聚合酶时，单核昔酸掺入的速率较高，75℃一80℃时，每个酶分子每秒钟可完成150个核昔合成.PCR每一周期需数分种，所以，一般取用20一30个周期能使目的DNA达到数百万倍扩增的反应只需数小时即可完成.在基因分离，突变体构建，DNA测序等方面，PCR方法均较之常规方法快速得多.例如，乾芸GENIN PCRroom-1st操作台PCR操作箱用常规方法建立cDNA文库或染色体DNA文库来分离基因，需花几个月时间，用PCR方法只要1一2个周;用M13法构建突变体需l一2个月，用PCR法仅用数天;PCR方法扩增的目的DN段可直接用作测序分析，较常用的通过克隆，培养扩增，纯化制备等步骤获得测序片段更为简便，省时。

3.灵教度高

PCR产物的生成，是以指数方式增加的，所以欲扩增pg量级的起始物到雌水平成放大真核细胞单拷贝基因，通过PCR方法都是不难完成的。PCR方法还可用单一双倍体细胞，一根头发，甚至单一精子进行DNA定型。

4.特异性强

作为引物的寡聚核昔酸与模板结合的正确性是决定反应产物是否特异的关键。TaqDNA聚合酶耐高温的性质，使得反应中引物与模板退火的步骤可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的目的DN段也能保持很高的正确程度。

5.对原始材料质t要求低

由于PCR技术有高灵敏度和强特异性，故仅含量(Pg,ng水平)的目的DNA的粗制品或者总DNA，就可以作为反应起始材料来获取目的DNA扩增产物。部分的降解的DNA材料也可以通过PCR多次反应周期，最终得到所需的含全长序列的DN段.用石蜡包埋的组织切片，甚至几千年前出土的文物，只需经过适当的处理，乾芸GENIN PCRroom-1st操作台PCR操作箱都可用PCR技术进行目的DNA的扩增，这样就有可能对系统保存的病理材料进行检测，解决以前无法解决的问题，同时，这一特性也使PCR技术应用到考古学，人类学等领域成为可能。

6.PCR技术应用范围广

PCR技术可应用于核酸结构和功能研究的各个领域，如DNA一级结构的测定，基因突变，基因工程，蛋白质工程及基因治疗等各个方面，都有着重要的应用.PCR技术的出现，使这些领域发生了显著的变化。

PCR技术的缺点

1、假阳性问肠

如果PCR反应系统中，既使污染一个拷贝的DN段，如果和引物结合以后，经过扩增反应，则判为阳性。但这种结果是一种假阳性结果。因此，反应系统中的样品，试管，移液器及试管要求确实无DN段的污染，否则其结果判定十分困难。

2.单核普酸的错误接人

由于TaqDNA聚合酶缺乏3"5’核酸外切酶的活性，因而不能纠正反应中发生的错误的核昔酸掺入;与大肠杆菌DNA聚合酶1的Klenow片段相比，用前者的反应发生错误掺入的较多.错误核昔酸掺入的频率还受反应条件的影响，所以对仅由TaqDNA聚合醛引发的错误掺入很难精确估计.TindanK.R.估计是每9000个核昔酸掺入中发生一次错误，乾芸GENIN PCRroom-1st操作台PCR操作箱而合成41000个核昔酸可能导致一次框码移位。但是，这种错误并不意味着PCR产物一定会发生序列改变，InnisM,A.发现，错误掺入的碱基有终止链延伸作用的倾向，这就使得发生了的错误不会再扩大。这一点对PCR结果有利。