液相色谱仪分析方法开发你学会了吗，一文带你了解【全网解说】

液相色谱仪分析方法开发你学会了吗？液相色谱仪是一种实验室内用来分析数据的一种仪器，是一种高效且准确的分析方法，而分析方法在不同的行业中就有不同的要求，部分行业对质量控制有很高的要求，液相色谱仪分析方法是质量控制的重要手段，那么液相色谱仪分析方法开发你学会了吗？接下来和天恒仪器小编一起了解一下吧。

液相色谱主要有亲水色谱、正相色谱、反相色谱、离子交换色谱、凝胶渗透色谱/体积排阻色谱等几种色谱分离模式。其中反相色谱是到目前为止*通用的 HPLC 方法，大约占所有方法的 60%，将近 95% 的色谱工作者都在使用。那么本文我们主要来讲反相色谱分析方法的开发。

反相色谱的原理：分析物与疏水固定相之间发生非极性、非特异性相互作用，即分析物在极性流动相和非极性固定相之间分配，与正相色谱相反。反相色谱柱通常使用的固定相有C18、C8苯基。反相色谱系统通常使用的流动相有:a. 水，可含缓冲液，或用酸或碱调节pH ， b . 可与水混溶的有机溶剂。

如何来开发一个合理可行的反相色谱分析方法，这其实是每一个色谱工作者必须面对并解决的问题。分析方法的开发其实主要是选择合适的色谱柱、流动相、检测波长来得到一个初步分析方法，后面再做其他方面的优化，使色谱峰之间的分离度、峰形、峰高、峰宽满足要求。下面我们就来仔细讲讲反相色谱分析方法的开发。

一、色谱柱的选择：

高效液相色谱分析中，色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，并且使方法更具稳定性。但是我们要清楚现在商品化的液相色谱柱比比皆是，根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择，但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异。即使都是C18柱，不同品牌、同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高温的、有适合碱性样品的等等。那就要求我们要对各种类型的色谱柱做充分的了解之后，才能做出合适的选择。

二、流动相的选择

一般来说，反相LC 的流动相包括水和作为改性剂的乙腈或甲醇。改性剂还有四氢呋喃（THF）和异丙醇。反相色谱中流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。对于离子型化合物，典型样品的保留随 pH 改变而明显变化。在这类反相系统中，控制 pH 对于保留和选择性的稳定非常重要。通常在 pH 2 到 4 条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性*高，因此色谱工作者将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。

为了有较好的重现性，所用的 pH 应高于或低于待分离溶质pKa或pKb上下一个pH单位。如果不清楚分析物的pKa，建议大家测试一种以上流动相 pH 可提供*好结果。大多数反相柱都可以在pH 2-8条件下使用，这样为分离选择*佳流动相 pH 提供了较宽的范围。流动相 pH 对色谱分离的影响有多种方式。根据所分析的化合物，pH可能影响选择性、峰形和保留。如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随 pH的改变变化非常明显，如果是非极性较强或中性的化合物，pH 对分离度和保留的影响一般不明显。

三、波长的选择

做分析方法开发我们需要二极管阵列检测器，选择检测波长和做色谱峰纯度检查，通过色谱 峰纯度检查来保证主峰里没有掩盖其它杂质，做纯度检测对波长选择的要求比较简单，原则 是把尽量多的杂质在色谱图上体现出来。很多杂质只有在低波长下才有紫外吸收，所以我们 选择尽可能低的波长，乙腈的截止波长在 190~195nm，用乙腈做流动相检测波长可以选择 在 210~220nm。也有公司要求分别选取产品紫外吸收*强的波段和 210~220nm 两个波段做 对比，哪个纯度低以哪个为准，这样可以更严格的控制产品的质量。

四、分析方法的优化

01

改变梯度斜率

更缓的梯度斜率可以提高分离度，降低梯度斜率将降低灵敏度， 更陡的梯度斜率可能压缩色谱峰，经常会导致分离度的降低， 增加梯度斜率将增加灵敏度， 改变梯度斜率时要平衡峰高与分离度的关系。

02

改变柱温

温度会影响色谱分析中的每一个化学过程，例如增加温度会降低移动相的粘度，如果流动速度恒定将导致系统背压降低，高温将改变固定相和流动相之间的分配速率，然而由于提高了被测物分散性，会加快优化线性速度。对温度变化敏感的化合物，温度的微小变化都会导致选择性发生独特变化。在这里我们要注意选择柱温一要考虑色谱柱的承受范围，二要考虑该温度下，检测成分是否会降解。

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综上所述，大家对液相色谱仪分析方法开发你学会了吗，有了一个了解，选择一家有靠谱售后的实验室仪器厂家也能帮大家解决很多仪器上的小问题，以上就是今天的全部内容了，如需了解更多请阅读《气相色谱仪应该怎么去操作呢？2022气相色谱仪的操作指南分享》